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摘要
目的基于微滴式数字PCR(ddRCR)技术建立EGFR-T790M突变检测方法, 并对该方法进行系统性优化及评估。方法针对T790M突变, 设计相关的探针引物, 建立ddPCR反应体系, 确立最佳退火温度并进行基本的性能验证。于2019年1至10月在山东第一医科大学附属肿瘤医院收集了72例NSCLC患者的循环游离DNA(cfDNA)样本并进行临床验证, 利用Kappa检验分析与伯乐ddPCR产品的一致性。结果建立并优化ddPCR反应体系, 线性评估示R2>0.99, 空白检测限为突变微滴数目≥2, 特异性良好, 灵敏度分析示突变检测下限可达到0.05%, 重复性及批间精密度变异系数(CV)<20%, 准确度相对偏差在±10%范围内。对72例NSCLC患者的cfDNA样本进行验证, 与伯乐ddPCR产品的一致性为91.67%(66/72, Kappa=0.749;P<0.001)。结论应用ddPCR成功建立非小细胞肺癌EGFR-T790M突变检测方法。
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