兔脱细胞软骨基质颗粒复合SD大鼠脂肪干细胞对软骨内成骨的促进作用

作者：边东潇; 包幸福; 胡敏^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2022, 48(04): 883-891.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20220406

• 脂肪干细胞
• 脱细胞软骨基质颗粒
• 骨再生
• 生物材料

目的:探讨兔脱细胞软骨基质颗粒(ACM)的生物相容性,阐明其对SD大鼠脂肪干细胞(ADSCs)软骨内成骨的促进作用。方法:提取原代SD大鼠ADSCs进行三向分化实验,流式细胞术检测细胞干性。采集3月龄新西兰白兔耳软骨,采用研磨浸泡法制备ACM备用。实验分为ACM组和ADSCs+ACM共培养组,在扫描电镜下观察ACM和ACM上ADSCs的超微形态表现,采用钙黄绿素/碘化丙啶(Calcein-AM/PI)荧光染色法观察ADSCs+ACM共培养组中ADSCs的生长情况。将ADSCs分为对照组和实验组(ADSCs与ACM共培养),采用CCK-8法检测2组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测成软骨诱导7和14 d时2组细胞中Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)、Ⅹ型胶原(COL-Ⅹ)、SOX转录因子9 (SOX-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性磷酸酶(ALP)和Runt相关转录因子2 (RUNX-2) mRNA表达水平。结果:成功制备兔ACM,提取的SD大鼠ADSCs可以进行三向分化且表达干细胞特异性表面标志物。ADSCs可以在ACM上黏附生长。与对照组比较,实验组ADSCs增殖活性明显升高(P<0.05)。软骨诱导7 d时,与对照组比较,实验组ADSCs中VEGF、 ALP和RUNX-2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05), COL-Ⅱ、 SOX-9和COL-ⅩmRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);软骨诱导14 d时,与对照组比较,实验组ADSCs中VEGF、ALP和RUNX-2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),COL-ⅩmRNA表达水平明显降低(P<0.05),COL-Ⅱ和SOX-9 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与软骨诱导7 d时比较,软骨诱导14 d时对照组ADSCs中VEGF、 ALP和RUNX-2 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),COL-Ⅱ和COL-ⅩmRNA表达水平明显升高(P<0.05);与软骨诱导7 d时比较,软骨诱导14 d时实验组ADSCs中COL-Ⅱ和COL-ⅩmRNA表达水平明显升高(P<0.05),VEGF、ALP和RUNX-2 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:兔ACM缺乏免疫原性,具有良好的生物相容性和成软骨诱导能力,有利于软骨内成骨过程的发生。

• 单位
  吉林大学口腔医院