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摘要
目的探讨蕃茄红素(lycopene)对人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophil elastae,HNE)诱导的气道上皮细胞黏液高分泌的影响。方法分别用0、25、50、75、100、200、400μmol/L的番茄红素处理人支气管上皮细胞株HBE16,采用MTT法检测细胞活性,确定番茄红素试验浓度;用HNE刺激HBE16细胞构建气道黏液高分泌模型,用番茄红素及AG1478进行干预,实验共分5组:对照组(无血清培养基培养)、HNE组(加入终浓度为50 nm/L的HNE)、HNE+蕃茄红素组(加入终浓度为100μmol/L的蕃茄红素,作用24 h后,给予终浓度为50 nm/L的HNE刺激)、HNE+AG1478组(加入5μmol/L AG1478预处理30 min后,给予终浓度为50 nmol/L的HNE刺激)、HNE+蕃茄红素+AG1478组(先加入100μmol/L的蕃茄红素作用24 h,再给予5μmol/L的AGl478处理30 min后,给予终浓度为50 nmoL/L的HNE刺激)。各组均于处理后24 h取样,采用RT-PCR法检测各组黏蛋白5ac(mucin,MUC5ac)基因、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组EGFR和磷酸化表皮生长因子受体(phosphorylated EGFR,P-EGFR)蛋白的表达;ELISA法检测各组MUC5ac蛋白的表达。结果番茄红素浓度低于100μmol/L时对细胞无明显损伤,以100μmol/L番茄红素作为实验浓度。与对照组比较,HNE组MUC5ac和EGFR基因mRNA转录水平均明显升高,HNE、HNE+番茄红素、HNE+AG1478组EGFR和P-EGFR蛋白的表达均明显升高(P均<0.01);与HNE组比较,HNE+番茄红素、HNE+AGl478和HNE+番茄红素+AG1478组MUC5ac和EGFR基因mRNA转录水平均明显降低,EGFR和P-EGFR蛋白的表达水平均明显降低(P均<0.01)。与对照组比较,HNE组MUC5ac蛋白含量明显升高(P<0.01);与HNE组比较,HNE+番茄红素、HNE+AG1478和HNE+番茄红素+AG1478组MUC5ac蛋白含量均明显降低(P均<0.01)。与HNE+AG1478组比较,HNE+番茄红素+AG1478组中MUC5ac、EGFR mRNA及蛋白表达水平、P-EGFR蛋白表达水平均明显降低(P均<0.01)。结论蕃茄红素通过下调EGFR水平对炎性气道上皮细胞黏液高分泌有抑制作用。
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