布鲁氏菌侵染过程中has-miR-5196-3p对炎症小体的调控作用

作者：李佳; 邓兴梅; 陶婷婷; 朱德馨; 邱润辉; 王梓行; 吴洁^*; 张辉^*

来源：中国畜牧兽医, 2021, 48(05): 1507-1515.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.05.001

• 布鲁氏菌
• 调节作用
• has-miR-5196-3p
• NOD样受体蛋白3炎症小体

试验旨在研究miRNA分子has-miR-5196-3p在布鲁氏菌侵染THP1细胞过程中对NOD样受体蛋白3炎症小体(NLRP3)的调控作用。运用TargetScan、MiRDB等生物信息学预测网站预测has-miR-5196-3p和NLRP3-3′UTR的结合位点,构建其野生型及突变型双荧光素酶报告载体,分别与has-miR-5196-3p mimics及阴性对照共转染293T细胞,通过双荧光素酶报告系统检测各组相对荧光素酶活性的变化,验证has-miR-5196-3p和NLRP3-3′UTR的靶向关系;布鲁氏菌侵染THP1细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase1)及has-miR-5196-3p mRNA的表达情况,Western blotting检测NLRP3和caspase1蛋白表达水平;将has-miR-5196-3p mimics、has-miR-5196-3p inhibitor及阴性对照转染至THP1细胞,实时荧光定量PCR及Western blotting检测NLRP3和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase1)的表达水平。结果显示,试验成功构建含有NLRP3-3′UTR的野生型及突变型双荧光素酶报告载体;has-miR-5196-3p mimics极显著降低pmirGLO-NLRP3-3′UTR-wt的相对荧光素酶活性(P<0.01);布鲁氏菌侵染THP1细胞后,NLRP3炎症小体被激活,而has-miR-5196-3p无明显变化(P>0.05);has-miR-5196-3p mimics能显著抑制NLRP3的表达(P<0.05),而has-miR-5196-3p inhibitor则相反。结果表明,miRNA分子has-miR-5196-3p可与NLRP3-3′UTR结合并抑制其表达,布鲁氏菌侵染THP1细胞过程中通过has-miR-5196-3p靶向负调节NLRP3炎症小体的表达及炎症的发生。

• 单位
  动物科技学院; 新疆生产建设兵团; 石河子大学