稳定转染PTEN基因后对卵巢上皮性癌细胞磷酸酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的影响

作者：翟永宁; 徐玲玲; 沈悦; XIA Hong; 沈宇飞

来源：中华妇产科杂志, 2010, 45(9): 682-685.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2010.09.010

• 卵巢肿瘤
• PTEN磷酸水解酶
• 1-磷脂酰肌醇3-激酶
• 原癌基因蛋白质c-akt
• 信号传导

目的 研究外源性PTEN基因稳定转染卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞后,对卵巢癌细胞磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号传导通路的影响.方法 构建表达野生型PTEN基因的重组载体pcDNA3.1A-PTEN质粒,并转染卵巢癌细胞株HO-8910细胞(重组载体组),以转染空载体pcDNA3.1A质粒(空载体组)作为阴性对照,以未转染质粒(空白组)作为空白对照.采用逆转录(RT)PCR技术检测3组细胞中PTEN、Akt1、Akt2、PI3K mRNA的表达水平,蛋白印迹法检测3组细胞中PTEN蛋白的表达强度,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测3组细胞的生长情况[以吸光度(A)值表示,A值越大表示生长速度越快].结果 表达野生型PTEN基因的重组载体pcDNA3.1A-PTEN质粒,经测序证实构建成功.重组载体组细胞中PTEN mRNA的表达水平为(17372±23)copy/ml,高于空载体、空白组[分别为(39±1)、(78±4)copy/ml],差异均有统计学意义(P＜0.05);重组载体组细胞中PTEN蛋白的表达强度也明显高于空载体、空白组.重组载体组细胞中Akt1、Akt2、PI3KmRNA的表达水平分别为(28±2)、(7±1)、(61±2)copy/ml,低于空载体[分别为(115±5)、(18±2)、(84±2)copy/ml]、空白组[分别为(77±4)、(17±2)、(1349±7)copy/m1],差异均有统计学意义(P＜0.05).培养第5天,重组载体组细胞生长速度(A值)为90 158±47,低于空载体、空白组(分别为148 251±65、250 115±62),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 转染表达野生型PTEN基因的重组载体能有效提高卵巢癌HO-8910细胞中PTEN mRNA和蛋白的表达,抑制细胞生长,并通过显著降低Akt1、Akt2、PI3K mRNA的表达水平,明显抑制PI3K/Akt信号传导通路.

• 单位
  南京医科大学附属南京妇幼保健院