酵母双杂交技术筛选乙型肝炎e抗原反式激活蛋白结合蛋白的基因

作者：王建军成军刘敏杨倩蔺淑梅刘妍

来源：中华肝脏病杂志, 2005, (04): 17-20.

• 肝炎e抗原
• 乙型
• 基因
• 酵母双杂交技术 Hepatitis B e agtigens
• Gene
• Yeast two-hybrid technique

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎e抗原反式激活蛋白(HBeAgTP)相互作用蛋白的基因。方法应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆HBeAg反式激活的新型靶基因HBeAgTP。用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBeAgTP基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,PCR从中扩增出目的片段并测序,进行生物信息学分析。结果成功克隆出HBeAgTP基因并在酵母细胞中表达,应用酵母双杂交筛选...

• 单位
  北京地坛医院; 解放军第302医院