溶藻弧菌T3SS exsD基因敲除突变株构建及其表型特征

作者：王俊霖; 招茵; 苏茵茵; 周诗慧; 曾福源; 谢妙; 王娜; 简纪常; 庞欢瑛^*

来源：广东海洋大学学报, 2021, 41(05): 35-43.

• 溶藻弧菌
• Ⅲ型分泌系统
• exsD基因
• 基因敲除
• 缺失株
• 表型特征

【目的】构建溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）Ⅲ型分泌系统（Type Ⅲ secretion system,T3SS）中的调控蛋白操纵子ExsD基因缺失株,研究exsD缺失株表型特征。【方法】采用overlapPCR技术构建缺失株ΔexsD,PCR检测缺失株ΔexsD的遗传稳定性,比较缺失株与野生株之间的生长速度、泳动能力、胞外酶活性、药物敏感性、毒力,分别采用结晶紫和共聚焦电镜方法测定生物膜的差异变化,通过qRT-PCR方法分析exsD的缺失对T3SS效应蛋白Hop转录的影响。【结果】缺失株ΔexsD构建成功;与野生株相比,ΔexsD遗传稳定性和生长速度无显著差别,但泳动能力极显著上升（P <0.01）,胞外蛋白酶活性显著上升（P <0.05）,形成生物膜能力在24 h时提高（P <0.05）;相比野生株,ΔexsD对米诺环素、庆大霉素、卡那霉素、多西环素、新霉素的敏感性从耐药变成中度敏感;ΔexsD缺失株的毒力显著上升,野生株对斑马鱼的半数致死剂量是缺失株的3.68倍。实时荧光定量结果显示,与HY9901野生型相比,exsD基因的缺失增加了效应蛋白Hop的转录表达。【结论】exsD基因对T3SS的致病性起负调控作用,为进一步阐明exsD基因在溶藻弧菌中的作用机理提供一定的理论基础。

• 单位
  广东海洋大学; 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室; 广东省教育厅; 中国检验检疫科学研究院