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摘要
Ragulator是mTOR信号通路中的一个关键蛋白复合物,分别由p18、p14、MP1、Lamtor4、Lamtor5五个蛋白通过相互作用复合而成。Ragulator在mTOR通路中起到结合Rag GTPases并锚定到溶酶体表面的作用,而后者招募并激活mTORC1。本研究通过生物信息学和分子克隆相结合的手段,构建各组分蛋白全长的质粒以及截短p18(41161)和Lamtor(83173)片段,相应转化到大肠杆菌中进行蛋白的表达。使用Ni2+柱亲和层析,阴离子交换层析和快速蛋白液相色谱相结合的蛋白纯化手段得到纯度较高的稳定的Ragulator复合物,为后续的晶体制备和生物学结构奠定了基础。同时也为进一步深入了解该信号通路的机制以及相关药物的开发与研究作出了贡献。
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单位生命科学技术学院; 上海交通大学; 微生物代谢国家重点实验室
