肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定

作者：黄宇; 余冰; 邢薇; 沈昕; 肖代雯; 刁智娟; 刘静; 代维; 赵晓蓉; 雷萍; 沈关心

来源：医药导报, 2006, (07): 642-645.

DOI：10.3870/j.issn.1004-0781.2006.07.018

• 单链抗体
• 肝癌细胞
• 双价抗体 Single-chain variable fragment
• Liver cancer cells
• Bivalent scFv

目的构建和表达与肝癌细胞特异结合的双价单链抗体(bivalentsingle-chainFv,BsFv),并鉴定该双价抗体的生物活性。方法以与肝癌细胞特异结合的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过聚合酶链反应(PCR)方法扩增出两个scFv片段,将其连入原核表达载体pAB1;构建的表达载体转化大肠埃希菌TG1,挑取单克隆细菌进行扩增,提取质粒酶切、测序鉴定。阳性菌经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE,Westernblot鉴定,间接免疫荧光流式细胞术(FACS)测定与肝癌细胞特异结合的特性。结果经酶切鉴定以及DNA测序结果表明该BsFv...

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 厦门市第一医院