非洲猪瘟病毒E301R蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

作者：刘学敏; 张元峰; 王永琦; 康力; 黄丽; 翁长江^*

来源：中国预防兽医学报, 2022, 44(09): 963-969.

• 非洲猪瘟病毒
• E301R蛋白
• 单克隆抗体
• 抗原表位

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)E301R蛋白单克隆抗体(MAb)，本研究通过原核表达系统表达并纯化了重组E301R蛋白(r E301R)。将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E301R蛋白MAb的杂交瘤细胞株8B3，亚类鉴定结果显示8B3 MAb为IgG1型。利用一系列表达部分重叠的重组E301R片段并经western blot鉴定8B3 MAb识别的抗原表位，结果显示，8B3 MAb识别的抗原表位为1MSEDIRRGPGRPPKKRVVPN20。采用western blot检测制备的8B3 MAb与HEK293T细胞中过表达的E301R蛋白(不同剂量)及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后(感染后不同时间)天然表达的E301R蛋白的反应性；采用间接免疫荧光试验(IFA)检测8B3 MAb与293T细胞中过表达的E301R蛋白的反应性及E301R蛋白在细胞中的定位。Western blot结果显示，过表达E301R蛋白的293T细胞出现了36 ku左右的特异性条带，且随着转染质粒量的增加，蛋白表达量增加；感染ASFV的PAM中(感染后8 h)出现了36 ku左右的特异性条带，且随着感染时间的延长，蛋白表达量增加。IFA结果显示，在过表达E301R蛋白的293T细胞中出现绿色荧光，且其定位于细胞质中。以上结果表明，制备的8B3MAb既能够与过表达的E301R蛋白，也能够与天然表达的E301R蛋白反应，反应性较强。将8B3 MAb用于免疫共沉淀(Co-IP)试验检测293T细胞中过表达的E301R蛋白和Flag-Agarose结合后与8B3 MAb的反应性。结果显示，8B3 MAb可以检测到结合在Flag-Agarose上的E301R蛋白，出现约36 ku的特异性条带。表明8B3 MAb可以用于Co-IP试验。这些研究结果为进一步研究E301R蛋白的功能奠定实验基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所