大鼠钙结合蛋白S100A9基因克隆、表达及纯化研究

作者：尹磊淼; 宋凯; 张庆华; 魏颖; 王宇; 徐玉东; 杨永清

来源：中国医药生物技术, 2010, (06): 405-409.

DOI：10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.06.001

• 钙结合蛋白质类
• 遗传载体
• 基因表达
• 自身免疫性疾病 Calcium-Binding proteins
• Genetic vectors
• Protein expression
• Autommune disease

目的构建大鼠钙结合蛋白S100A9的原核表达质粒并获得纯化重组蛋白。方法根据大鼠S100A9基因mRNA序列,设计PCR引物,常规扩增后重组连入原核表达载体pET32a,并进行序列测定。利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和不同温度诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定结果,并亲和层析纯化重组蛋白。结果 PCR扩增获得的条带与预期的DNA表达片段大小一致,克隆构建了pET-32a-S100A9原核表达载体,测序结果与预期完全一致,经亲和层析纯化获得毫克级纯化重组蛋白,并发现该蛋白在21℃有比较强的表达。结论为进一步探讨S100A9蛋白生物学功能奠定基础。

• 单位
  上海市针灸经络研究所; 生物芯片上海国家工程研究中心; 上海中医药大学