靶向人RIP RNAi真核表达载体构建及在人肝癌细胞Huh7细胞中的表达

作者：吴鹏; 孙竞; 李晓强; 龚克

来源：湖北医药学院学报, 2011, (02): 112-115.

• RIP
• siRNA
• 真核表达载体 RIP
• siRNA
• Eukaryotic expression vector

目的:构建靶向人RIP的小分子干扰RNA(siRNA)真核表达载体(pSUPERpuro-RIP),在Huh7细胞系中瞬时表达后,检测其对RIP的沉默效果。方法:设计4对含RIP mRNA特异性序列的60 nt DNA链,通过基因克隆技术将其插入真核表达载体pSUPER-puro,构建重组pSUPERpuro-RIP siRNA载体,以EcoRⅠ和HindⅢ双酶切及测序验证其正确性。再瞬时转染Huh7细胞,Western blot检测RIP蛋白表达。结果:酶切测序证实载体构建成功,无碱基突变。Western blot结果表明pSUPERpuro-RIP siRNA在Huh7细胞系中有较好的沉默...

• 单位
  湖北医药学院附属太和医院; 武汉大学