硫酸乙酰肝素对乳鼠颅骨成骨细胞增殖及分化成熟的影响

作者：刘仪; 徐朱杰; 王瑞; 邱立朋; 陈敬华

来源：中国骨质疏松杂志, 2018, 24(04): 421-428.

• 硫酸乙酰肝素
• 成骨细胞
• 细胞培养
• 矿化
• 骨修复

目的探讨硫酸乙酰肝素(heparin sulfate,HS)对乳鼠颅骨成骨细胞增殖及分化成熟的影响。方法酶消化法分离乳鼠颅骨的成骨细胞,培养并进行鉴定。取生长情况良好的成骨细胞制成浓度为2.0×104个/m L的细胞悬液,依据在成骨细胞培养基中添加不同浓度的HS,将实验分为A组(0μg/m L)、B组(1μg/m L)、C组(5μg/m L)、D组(10μg/m L)、E组(25μg/m L)、F组(50μg/m L)、G组(100μg/m L)。以A为对照组,其余组为实验组。采用噻唑蓝(MTT)法检测48 h及96 h不同HS浓度下细胞的增殖情况,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)检测试剂盒测定细胞24 h和48 h的AKP活性,Western Blot法定量24 h和48 h成骨标志蛋白I型胶原蛋白(Collagen I)和Runx-2蛋白的表达,茜素红染色法计数14 d成骨细胞基质矿化结节量。结果 MTT检测示,硫酸乙酰肝素在48 h、96 h均抑制成骨细胞的增殖,相比于对照组差异有统计学意义(P<0.05)。AKP活性检测示,24 h和48 h的E组和F组的AKP活性相比于A组明显增高(P<0.05),且F组的AKP活性最高。Collagen I和Runx-2蛋白表达检测显示,50μg/m L HS作用24 h和48 h后与对照组相比,Runx-2和Collagen I蛋白的表达均升高;100μg/m L HS作用24 h和48 h后与对照组相比,Runx-2和Collagen I蛋白的表达均降低。矿化结节染色示,B、C、D、E、F组均能促进矿化结节的生成,F组对成骨细胞基质矿化作用最强,B、C、D、E和F组相比于A组差异均有统计学意义(P<0.05)。而G组的矿化结节数量低于A组。结论 HS的成骨作用显著,且50μg/m L HS促进成骨细胞成熟分化的能力显著优于其他浓度。

• 单位
  南京医科大学; 无锡市人民医院; 江南大学