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摘要
目的探讨微RNA-204(miR-204)靶向硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用。方法选择无特定病原体级雄性Sprague Dawley大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、阴性对照(NC)组、miR-204过表达(miR-204 agomir)组,每组12只。模型组、NC组、miR-204 agomir组大鼠通过盲肠结扎穿刺法建立脓毒症模型,假手术组大鼠仅开腹不做盲肠结扎及穿孔;脓毒症模型建立后,NC组、miR-204 agomir组大鼠分别通过尾静脉注射2μL agomir NC和2μL miR-204 agomir,模型组和假手术组大鼠注射等体积的生理盐水。于造模24 h后,断颈处死各组大鼠,取肺组织,采用光学显微镜观察各组大鼠肺组织病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组大鼠肺组织中miR-204、TXNIP及硫氧还蛋白(Trx) mRNA表达水平;取HEK-293T细胞,采用双荧光素酶报告基因法检测试剂盒检测miR-204和TXNIP 3′UTR非编码区(3′UTR)靶向关系;Western blot法检测各组大鼠肺组织中TXNIP及Trx蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果假手术组大鼠肺泡形态结构正常;模型组和NC组大鼠肺泡壁增厚,肺组织中出现大量炎症细胞浸润;与模型组和NC组比较,miR-204 agomir组大鼠肺组织炎症细胞浸润减少,肺泡损伤明显改善。模型组和NC组大鼠肺组织miR-204相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);模型组与NC组大鼠肺组织中miR-204相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-204 agomir组大鼠肺组织中miR-204相对表达量显著高于假手术组、模型组和NC组(P<0.05)。模型组和NC组大鼠肺组织TXNIP mRNA和蛋白相对表达量显著高于假手术组(P<0.05);模型组与NC组大鼠肺组织TXNIP mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-204 agomir组大鼠肺组织TXNIP mRNA和蛋白相对表达量显著低于假手术组、模型组和NC组(P<0.05)。miR-204 agomir+TXNIP 3′UTR-野生型组荧光素酶活性显著低于阴性对照+TXNIP 3′UTR-野生型组(P<0.05);miR-204 agomir+TXNIP 3′UTR-突变型组与阴性对照+TXNIP 3′UTR-突变型组荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、NC组和miR-204 agomir组大鼠肺组织Trx mRNA和蛋白相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);miR-204 agomir组大鼠肺组织Trx mRNA和蛋白相对表达量显著高于模型组和NC组(P<0.05);模型组与NC组大鼠肺组织中Trx mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、NC组和miR-204 agomir组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6和MDA水平显著高于假手术组,SOD水平显著低于假手术组(P<0.05);miR-204 agomir组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6和MDA水平显著低于模型组和NC组,SOD水平显著高于模型组和NC组(P<0.05);模型组与NC组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6、MDA和SOD水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-204可通过靶向TXNIP抑制脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应和氧化应激,其机制可能与Trx表达升高有关。
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单位琼海市人民医院; 中心实验室
