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摘要
目的：本研究旨在观察健脾活骨方(JPHGP)对实验性酒精性股骨头坏死(AONFH)血管损伤的修复作用，并基于血管内皮细胞生长因子(VEGF)/血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探索其作用机制。方法：实验采用46%酒精度红星二锅头10 m L·kg-1·d-1灌胃建立AONFH大鼠模型，观察JPHGP不同剂量组(2.5、5.0、10.0 g·kg-1)的干预作用，选择健骨生丸(JGS,1.5 g·kg-1)为阳性药物；给药8周后，Micro-CT扫描分析股骨头骨计量学，墨汁灌注观察股骨头骨髓内微血管面积，苏木素-伊红(HE)染色法观察病理学改变程度，免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测股骨头中血小板-内皮细胞黏附分子31(CD31)、VEGF、VEGFR2、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Ak)和抑癌基因(PTEN)的蛋白表达水平。结果：与正常组比较，模型组大鼠股骨头骨小梁断裂变细，空骨陷窝增多，脂肪细胞数量明显增多和直径显著变大(P<0.01),Micro-CT影像学结果显示骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)均明显降低(P<0.05,P<0.01)，骨表面积体积比(BS/BV)和骨小梁分离度(Tb.Sp)均显著升高(P<0.01)，墨汁灌注结果表明股骨头髓腔内微血管面积显著减少(P<0.01)；与模型组比较，JPHGP作用后能降低AONFH大鼠股骨头的空骨陷窝率、脂肪细胞面积和直径，Micro-CT影像学结果显示JPHGP低剂量组BV/TV、Tb.Th、Tb.N均明显升高(P<0.05,P<0.01),BS/BV显著降低(P<0.01),BMD呈升高趋势，Tb.Sp呈下降趋势，但差异均无统计学意义，JPHGP中、高剂量组的BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N均明显升高(P<0.05,P<0.01),BS/BV、Tb.Sp明显降低(P<0.05,P<0.01)，并明显升高股骨头髓腔内微血管面积(P<0.05,P<0.01)，扩大股骨头髓腔内微血管面积；与正常组比较，模型组大鼠均显著下调CD31、VEGF、VEGFR2、PI3K、p-Akt和上调PTEN的表达含量(P<0.01)，与模型组比较，JPHGP作用后中、高剂量组显著升高大鼠股骨头CD31、PI3K、p-Akt表达含量(P<0.01)，降低PTEN蛋白的表达水平(P<0.01)，同时JPHGP作用后上调VEGF、VEGFR2表达含量(P<0.05,P<0.01)。结论：JPHGP对AONFH股骨头血管损伤具有修复作用，其机制可能与激活VEGF/VEGFR2/PI3K/Akt信号通路有关，相关研究结果将为JPHGP的临床应用提供一定科学依据和参考。
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单位承德医学院; 中国中医科学院中药研究所
