分支杆菌噬菌体Leo生物学特性及抗结核作用

作者：江莉莎; 邬亭亭; 刘平; 张莉; 姚义勇; 郭述良

来源：中国人兽共患病学报, 2015, 31(03): 193-198.

DOI：10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.001

• 分支杆菌噬菌体Leo
• 生物学特性
• 结核分支杆菌

目的明确分支杆菌噬菌体Leo的生物学特性及其抗结核作用,为"鸡尾酒疗法"筛选候选噬菌体。方法采用双层平板法制备噬菌体Leo,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;提取噬菌体DNA,限制性内切酶酶切分析确定其核酸类型;以不同MOI扩增噬菌体Leo,确定最佳MOI及最低MOI;通过一步生长曲线,确定潜伏期及裂解量;采用终点滴定反浊法测定耻垢分支杆菌对噬菌体Leo的耐受突变率;检测噬菌体Leo对酒精、温度的耐受性及在不同pH下的裂解能力;通过体外杀结核分枝杆菌实验,明确噬菌体Leo对结核分枝杆菌的杀灭作用。结果 Leo噬菌斑圆形透明,边缘清晰,含对称的多面体头部,直径(70±3.0)nm,可弯曲的尾部,尾长(211±31.7)nm;其基因组能被限制性内切酶HindⅢ、BglⅠ切开;最佳MOI为0.0 0001,最低MOI为0.0 001,潜伏期为150min,裂解量74,耐受突变率为10-7。Leo对温度、酒精敏感,在pH 7.4和pH 5.0时均能裂解宿主菌。Leo作用于结核分支杆菌72h后,Leo组菌量明显低于空白组(P<0.05)。结论分支杆菌噬菌体Leo属长尾噬菌体科,双链DNA噬菌体,能够杀灭结核分支杆菌,可作为"鸡尾酒疗法"的候选噬菌体。

• 单位
  成都市第三人民医院; 重庆医科大学附属第一医院; 重庆市长寿区人民医院