抗猪流行性腹泻病毒纳米单链抗体CNC-CBD-scFv的制备及鉴定

作者：刘慧敏; 李浩; 朱文娇; 常琛; 路万平; 杨国庆^*

来源：中国兽医学报, 2019, 39(07): 1256-1268.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.07.03

• 猪流行性腹泻病毒
• 纤维素结合结构域
• CBD-scFv
• 纳米纤维素

为防治猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),本文制备纳米化抗PEDV单链抗体(single-chain fragment,scFv)并验证其生物学特性。通过PCR方法扩增含有纤维素结合结构域(cellulose binding domain,CBD)的单链抗体基因CBD-scFv,构建抗PEDV的原核重组表达载体pET19b-CBD-scFv,鉴定正确后进行蛋白表达与鉴定。经硫酸水解法制备纳米纤维素(cellulose nanocrystal,CNC)后,将纯化复性后的CBD-scFv蛋白与CNC孵育结合得到纳米抗体CNC-CBD-scFv,通过SDS-PAGE和透射电镜鉴定复合物的结合效果。SDS-PAGE与Western blot结果表明抗体蛋白CBD-scFv正确表达;制备的纳米纤维素粒度均达到纳米材料级别;CNC与CBD-scFv结合后SDS-PAGE与透射电镜结果说明CNC与CBD-scFv在室温条件下可高效结合。本试验在高效表达合成复合纳米抗体材料的同时为PEDV的防治及应用奠定了一定的试验基础。

• 单位
  河南农业大学; 生命科学学院