先导编辑在鸡胚成纤维细胞系中的效率研究

作者：高翔; 韩瑞莹; 张喆; 伍钊涛; 唐非台; 王晓丽; 唐小川^*

来源：中国家禽, 2023, 45(12): 1-8.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.12.001

• 先导编辑
• 鸡胚成纤维细胞系
• CRISPR基因编辑
• 同源重组修复

为探究先导编辑在鸡细胞系中的基因编辑效率，研究通过点突变和重组连接的方式构建先导编辑的表达质粒，使用在线软件设计并化学合成靶向OVM、MSTN和NHE1基因的先导编辑引导RNA(pegRNA)质粒，脂质体转染上述质粒至鸡胚成纤维细胞系（DF-1）中并进行药物筛选，PCR产物TA克隆测序检测并统计各位点的编辑效率。结果显示：测序和PCR鉴定结果表明先导编辑表达质粒构建成功；DF-1中OVM基因经先导编辑后成功产生错义突变，其中精确编辑效率为41.10%、错误插入与缺失（indel）效率为6.67%，均显著优于对照组的常规基因编辑（P<0.05）;MSTN基因的先导编辑精确编辑效率为10.24%、indel效率为13.57%,NHE1基因的先导编辑精确编辑效率为24.88%、indel效率为7.18%。结果验证了先导编辑在鸡细胞系中的有效性和普适性，为其进一步应用于基因编辑鸡的制备奠定基础。

• 单位
  广西大学