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摘要
目的:探讨上调或下调微RNA (microRNA,miRNA,miR)-195-5p对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231和BT-549细胞增殖、迁移和侵袭的影响,及可能的作用机制。方法:应用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析miR-195-5p在乳腺癌中的表达水平。将miR-195-5p-模拟物(mimics)转入MDA-MB-231细胞构建外源性miR-195-5p高表达的重组细胞,同时将miR-195-5p-抑制剂(inhibitor)转入BT-549细胞构建沉默内源性miR-195-5p表达的重组细胞。实时荧光定量PCR法检测重组细胞中miR-195-5p的表达水平;MTT法检测细胞的增殖能力;划痕愈合实验及Transwell小室法分别检测细胞的横向、纵向迁移能力及侵袭能力;实时荧光定量PCR法检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转录因子Snail和波形蛋白(vimentin)及迁移相关因子yes相关蛋白1 (yes-associated protein-1,YAP-1) mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测EMT相关标志物锌指蛋白E盒结合同源异形盒1 (zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)、E-cadherin、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和vimentin以及迁移相关标志物YAP-1和磷酸化YAP-1蛋白的表达水平。结果:miR-195-5p在乳腺癌中的表达水平低。MDA-MB-231/mimics细胞中miR-195-5p的表达水平明显上调(P <0.001),BT-549/inhibitor细胞中miR-195-5p的表达水平显著下调(P<0.001)。miR-195-5p表达上调后MDA-MB-231/mimics细胞的增殖能力明显减弱(P<0.001),miR-195-5p表达下调后BT-549/inhibitor细胞的增殖能力明显增强(P <0.05);MDA-MB-231/mimks细胞的横向和纵向迁移及侵袭能力均被明显抑制(P值均<0.05),BT-549/inhibitor细胞的横向和及纵向迁移能力及侵袭能力均被明显提高(P值均<0.05)。实时荧光定量PCR法显示,MDAMB-231/mimics细胞中上皮细胞标志物E-cadherin mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而间质细胞标志物vimentin和N-cadherin mRNA的表达水平则显著下调(P<0.05);蛋白质印迹法检测结果显示,MDAMB-231/mimics细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.001),而vimentin (P<0.05)、N-cadherin (P<0.01)和ZEB1 (P<0.05)蛋白的表达水平则明显降低,提示EMT过程可能被抑制;MDA-MB-231/mimics细胞中迁移相关标志物YAP-1及其磷酸化蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05和P<0.01)。结论:miR-195-5p能抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT的发生,该过程可能与HippoYAP信号通路的抑制相关。
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