化瘀明目方含药血清对高糖诱导的HRMECs功能紊乱模型血管形成的作用及机制研究

作者：马孝秋; 左韬^*; 马贤德^*; 赵磊

来源：中药新药与临床药理, 2023, 34(12): 1668-1677.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2023.12.003

• 化瘀明目方
• 糖尿病视网膜病变
• 人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)
• 血管新生
• 高糖

目的 探究化瘀明目方含药血清对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（Human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs）血管形成的影响及可能机制。方法 CCK-8法筛选合适的糖浓度和含药血清体积分数，建立单纯高糖因素诱导的HRMECs功能紊乱模型。将HRMECs分为6组，正常对照组予以正常ECM培养基（含5.5 mmol·L-1葡萄糖）+10%空白血清；甘露醇对照组、模型组在正常对照组基础上分别加入19.5 mmol·L-1甘露醇、19.5 mmol·L-1D-葡萄糖；化瘀明目方低、中、高剂量组在模型组基础上分别加入10%低、中、高剂量含药血清（不加空白血清）。克隆实验检测细胞集落形成数，Transwell实验检测细胞迁移数，管腔形成实验检测细胞成管数，免疫荧光实验、Western Blot实验和RT-PCR实验检测第八因子（FactorⅧ）、血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)、细胞分化因子（CD34）、血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白及mRNA表达水平。结果 与正常对照组比较，模型组能够促进HRMECs集落形成（P<0.01）、细胞迁移（P<0.01）、管腔形成（P<0.01）,FactorⅧ、CD31、CD34、VEGFA、VEGFR2蛋白及mRNA表达水平明显升高（P<0.01）；与模型组比较，化瘀明目方低、中、高剂量含药血清抑制HRMECs集落形成（P<0.05,P<0.01）、细胞迁移（P<0.01）、管腔形成（P<0.05,P<0.01）,FactorⅧ、CD31、CD34、VEGFA、VEGFR2蛋白及mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）；正常对照组与甘露醇对照组间各项检测的差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 化瘀明目方含药血清能够抑制高糖诱导下HRMECs细胞的增殖、迁移和管腔形成，预防或减轻血管新生，其机制可能与调控VEGFA/VEGFR2信号通路有关。

• 单位
  辽宁中医药大学; 第二临床学院; 辽宁省中医药研究院