超高效液相色谱串联质谱同时检测人血清5种甾体激素方法学及生物参考区间的建立

作者：陆优丽; 杨双双; 张美微; 欧美贤; 董春霞; 沈薇薇; 姜凤丽; 李水军^*

来源：检验医学, 2022, 37(02): 165-173.

• 超高效液相色谱
• 质谱
• 甾体激素
• 血清
• 参考区间

目的 建立超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）同时测定人血清中睾酮（T）、双氢睾酮（DHT）、雄烯二酮（AD）、脱氢表雄酮（DHEA）和17α羟孕酮（17OHP）的方法，并确定表观健康人群血清中5种甾体激素的参考区间。方法 血清样品沉淀后经SOLAμHRP固相萃取柱纯化，采用Poroshell 120 ECC18色谱柱分离，用含0.05%甲酸的30%乙腈溶液和90%乙腈溶液梯度洗脱。采用电喷雾正离子多反应监测模式检测，采用同位素内标法定量检测甾体激素的浓度。对建立的UPLC-MS/MS方法进行全面的性能验证，并建立适用于上海地区人群人血清5种甾体激素的参考区间。结果 UPLC-MS/MS检测人血清中5种甾体激素的最低定量限为0.01～0.10 ng/mL，标准曲线范围覆盖1 000倍，r~2值均>0.999 5，线性良好，样本经稀释后可报告范围覆盖5 000倍。5种分析物批内与批间的准确度为95.0%～105.6%，精密度均<8%。8种结构类似物对目标分析物均无干扰，高三酰甘油不影响检测结果，溶血可导致DHEA检测值降低。各分析物的提取回收率为60.5%～93.3%，内标校正后无明显的基质效应。血清样品室温放置4 h、-25～-15℃放置30 d、-90～-70℃放置100 d，甾体激素均可被稳定测量。T和17OHP项目参加2019年国家卫生健康委临床检验中心全国内分泌正确度验证质谱法调查，UPLC-MS/MS检测结果与靶值的偏差为-5.00%～0.38%。用UPLC-MS/MS检测367名体检者血清，结果显示，男性与女性之间5种甾体激素浓度差异均有统计学意义（P<0.05），将女性体检者分为16～50岁（123名）和>50岁（124名）2个年龄亚组，2个亚组之间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 建立并验证了一种可同时检测人血清中5种甾体激素的UPLC-MS/MS方法，该方法适用于上海市徐汇区中心医院中心实验室的参考区间。

• 单位
  复旦大学附属中山医院; 上海市徐汇区中心医院