外源性小分子双链RNA激活肾癌细胞野生型P53蛋白表达作用的研究

作者：黄耿; 桂定文; 姜卫东; 叶志华

来源：医学研究杂志, 2018, 47(05): 183-187.

• dsRNA
• P53
• P21
• 肾癌

目的通过转染外源性低分子双链RNA(dsRNA)ds P53285至人肾癌细胞系ACHN和786-O,观察其激活肾癌细胞中抑癌蛋白野生型P53的表达作用。方法根据对肾癌细胞的不同处理分为3组,即空白对照(mock)组、阴性对照(转染ds Control)组和实验(ds P53-285)组。荧光实时定量聚合酶链反应(QPCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测P53 mRNA、P21 mRNA和相应蛋白的表达水平。MTT法和集落形成实验检测各组细胞活力及增殖能力。结果 QPCR检测显示ds P53-285能明显促进两种肾癌细胞中P53 mRNA和P21 mRNA水平的升高;与阴性对照组ds Control组相比,ds P53-285分别上调ACHN和786-O细胞中P53 mRNA的表达2.84倍(P<0.01)和3.20倍(P<0.01),ds P53-285分别上调ACHN和786-O细胞中P21mRNA的表达2.33倍(P<0.01)和2.59倍(P<0.01);mock组与ds Control组相比,两种细胞系中P53 mRNA和P21 mRNA的表达差异均没有统计学意义(P>0.05)。Western blot法检测显示在两种细胞系中,P53蛋白、P21蛋白表达水平的上调与相应的P53 mRNA、P21 mRNA水平的上调一致。MTT检测结果显示,与ds Control组相比,转染ds P53-285后,ACHN和786-O细胞活力显著降低(P<0.01),mock组与ds Control组无明显差异(P>0.05)。集落形成实验显示,ds P53-285组的集落数数量显著较少(P<0.05),mock组与ds Control组无明显差异(P>0.05)。结论外源性ds P53-285能显著激活肾癌细胞中P53基因的表达,激活的P53蛋白为野生型而非突变型,并可以显著抑制肾癌细胞的生长。

• 单位
  湖北理工学院; 黄石市中心医院