TAT-E4orf4融合蛋白对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

作者：殷洁烽; 徐统球; 张喆; 孙元水^*

来源：浙江中西医结合杂志, 2021, 31(02): 111-124.

• 胃癌
• 凋亡
• 细胞穿膜肽
• 腺病毒早期区4第4编码蛋白
• 迁移

目的分析TAT-E4orf4融合蛋白对胃癌AGS细胞凋亡的影响及其作用机制。方法PCR法构建pET28-his-TAT-E4orf4表达载体,经PCR酶切鉴定后,诱导表达。并分别用pET28、p ET28-his-E4orf4和pET28-his-TAT-E4orf4处理胃癌AGS细胞,分别采用MTT法和Transwell小室检测TAT-E4orf4对胃癌细胞增殖和迁移的影响,以流式细胞仪检测刺激后胃癌细胞的凋亡,以Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspases)和酪氨酸激酶(Src)信号轴上关键蛋白表达的变化。结果 PCR和Western blot实验结果证实成功构建pET28-TAT-E4orf4表达载体,MTT法显示pET28-his-E4orf4和pET28-his-TAT-E4orf4刺激后,胃癌AGS细胞增殖活性较空白对照组(1.01±0.12)分别下降至(0.69±0.44)和(0.41±0.06),且后者下降更为明显(P<0.05)。与MTT实验结果趋势相似,Transwell实验的结果,pET28-his-TAT-E4orf4刺激后胃癌细胞迁移数目显著减少到(163.21±36.77)个,与Blank组(796.48±114.35)个、pET28组(803.71±127.39)个、pET28-his-E4orf4组(287.06±78.51)个比较,差异具有统计学意义(P均<0.05)。流式细胞术检测结果显示,TATE4orf4融合蛋白干预后,AGS细胞凋亡率显著增加(33.40%),与Blank组(6.28%)、pET28组(8.40%)、pET28-his-E4orf4组(20.50%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot实验结果表明,Caspase-3和Caspase-9的表达水平无明显变化(P>0.05),而Src-ERK-AKT信号轴相关蛋白的表达在TAT-E4orf4融合蛋白干预后出现明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论TAT-E4orf4融合蛋白能抑制胃癌细胞增殖和迁移,促进胃癌细胞凋亡,与Caspase途径无关,主要依赖对Src-ERK-AKT信号通路的调控。

• 单位
  浙江省立同德医院