牛乳腺炎标志物血清淀粉样蛋白A3的原核表达及其单克隆抗体的制备

作者：樊一明; 刘鑫楠; 魏治静; 包永占; 董维亚; 张小兵; 吴萌^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(03): 395-402.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0034

• 牛血清淀粉样蛋白A3(M-SAA3)
• 乳腺炎
• 原核表达
• 单克隆抗体(MAb)

为了表达牛乳腺相关血清淀粉样蛋白A3(M-SAA3)基因,获得其重组蛋白及单克隆抗体(MAb),本研究将编码M-SAA3的基因片段经密码子优化后接入载体pET-30a(+)中,然后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达。以镍柱纯化蛋白后,免疫BALB/c小鼠制备M-SAA3 MAb。结果显示,扩增的M-SAA3基因序列无误;M-SAA3基因成功转入表达载体;菌液的诱导表达D600值=0.8为最优条件;重组蛋白纯度可达98%,浓度为1.146 mg/m L;制得7株MAb效价均>1∶1 600,亚型均为Ig G3,研制的3B2B4 MAb可分别与M-SAA3的重组及天然蛋白特异性结合。该成果为将来针对M-SAA3的奶牛乳腺炎检测产品研发提供了重要原料。

• 单位
  河北省科学院生物研究所; 河北农业大学