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摘要
目的:探讨USP9X在etoposide促结肠癌细胞SW620凋亡中的作用和可能的机制。方法:设计并合成USP9X的shRNA和对照shcontrol,采用半定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率。结肠癌细胞SW620分别转染USP9X-shRNA和shcontrol后用etoposide处理,检测MCL1的蛋白水平变化并通过c-PARP的水平检测细胞的凋亡水平。结果:半定量RT-PCR和Western blot检测显示在SW620细胞中USP9X-shRNA能够显著降低USP9X的mRNA和蛋白的表达,抑制率达70%,该条shRNA可以作为有效干扰序列进行后续实验。20μg/mL etoposide处理24 h后,经c-PARP的水平检测发现感染USP9X-shRNA的SW620细胞比对照组细胞的凋亡率显著增加。结论:以RNA干扰技术沉默USP9X基因可增加结肠癌细胞SW620对etoposide的敏感性,显著增加etoposide诱导的结肠癌SW620细胞的凋亡,推测USP9X基因可能成为结肠癌基因治疗的一个新靶点。
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单位淄博市中心医院; 国家海洋局第三海洋研究所
