人生存素survivin的克隆与分泌表达

作者：代晓华; 姜琳琳; 程昕; 纪庆; 朱惠芳; 熊冬生; 周圆

来源：生物技术通报, 2012, (05): 89-92.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2012.05.022

• 生物医学工程
• 生存素
• 分泌表达
• 大肠杆菌
• 凋亡

旨在克隆人生存素(survivin)基因,并在原核系统中进行可溶性表达。采用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MCF-7中克隆survivin基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建带有六聚组氨酸纯化标记的人survivin基因原核表达载体pAYZ-survivin,将该载体转化大肠杆菌16C9进行表达。结果表明,成功克隆了survivin基因并构建了重组表达载体。融合蛋白主要以可溶性状态分泌到周质腔内存在。分离提取蛋白,HiTrap金属螯合柱进行亲和层析纯化,并经Western blot验证了高纯度survivin融合蛋白的表达。

• 单位
  实验血液学国家重点实验室; 天津市口腔医院; 中国医学科学院北京协和医学院; 南开大学