二草清肝汤含药血清对人源HL-7702肝细胞凋亡的影响及其机制研究

作者：黄健莹; 欧阳钦^*; 吴春明; 刘三海; 王丽佳; 赵安静; 谢远太

来源：浙江中医杂志, 2023, 58(11): 788-791.

DOI：10.13633/j.cnki.zjtcm.2023.11.012

• 二草清肝汤
• 肝细胞凋亡
• TLR4
• 内毒素
• PI3K/AKT/GSK3β信号通路

目的：探究二草清肝汤（EQD）含药血清对脂多糖（LPS）诱导的人源HL-7702肝细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法：制备急性肝衰竭小鼠模型，分组后分别对各组小鼠以相应剂量EQD和生理盐水进行灌胃，末次注射LPS 24h后，提取含药血清备用；采用LPS诱导人源HL-7702肝细胞建立细胞凋亡模型，随机分为空白对照组、LPS组、LPS+EQD低剂量组、LPS+EQD中剂量组、LPS+EQD高剂量组，分别采用相应剂量的含药血清100μL预处理2h后，然后再加入10μg/mL的10μL LPS处理24h，空白对照组予相同剂量的生理盐水。采用流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫荧光法观察GSK3β核易位情况，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测兔抗人单克隆抗体（Bax）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达，Western-blot法检测HL-7702细胞内AKT、p-AKTS、GSK3β、p-GSK3β的表达。结果：与空白对照组比较，LPS处理后，HL-7702凋亡率显著上升（P<0.05）；经低、中、高EQD处理后，结果显著下降（P<0.05）。免疫荧光检测显示，GSK3β主要在HL-7702细胞质表达；与空白对照组比较，LPS处理后，HL-7702中GSK3β表达显著上升，且趋向于向细胞核中聚集（P<0.05）；经低、中、高EQD分别处理后，表达显著下降且趋向于向细胞质中聚集（P<0.05）。qPCR检测显示，与对照组比较，LPS处理后，HL-7702细胞中Bax、TNF-α、IL-6显著上升，Bcl-2表达显著下降（P<0.05）；经低、中、高EQD处理后，前者显著下降，后者显著上升（P<0.05）。Western-blot检测显示，与对照组相比，LPS处理后，AKT、GSK3β、p-AKT、p-GSK3β表达显著上升（P<0.05）；经低、中、高EQD处理后，AKT、GSK3β表达显著上升（P<0.05），其余表达显著下降（P<0.05）。结论：EQD预处理可以显著降低LPS诱导的人源HL-7702肝细胞凋亡率，其机制可能与抑制TLR4/PI3K/AKT/GSK3β信号通路有关。

• 单位
  浙江中医药大学附属温州市中医院