环氧合酶2 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因载体的构建

作者：王黎; 杨国栋; 傅海燕; 卢晓昭; 韦梦影; 卢兹凡

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2012, (06): 656-659.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006454

• 环氧合酶2
• 3’非翻译区
• 双荧光素酶报告系统
• 转录后调控

目的:通过构建环氧合酶2(COX2)mRNA 3’UTR的全长及其截短体荧光素酶报告基因载体,为研究COX2基因在炎症条件下的的转录后调控提供有效的工具。方法:通过从胃癌细胞SGC-7901提取RNA,反转录成cDNA后,以此为模板,PCR扩增COX2 3’非翻译区(3’-UTR)全长及截短的序列,并将该序列连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-control,构建pGL3-COX2 3’UTR全长及pGL3-COX23’UTR不同截短体。测序后将上述载体分别与pRL-TK载体共转染293-T细胞,48 h后裂解细胞检测荧光素酶的活性。最后通过ELISA检测在IL-1β的刺激下COX2的下游产物...

• 单位
  第四军医大学