人肠道病毒71型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价

作者：王文伟; 胡海涛; 蔡蓓蓓; 仝光杰; 何成; 楼觉人^*

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(12): 1406-1411.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003485

• 肠道病毒71型
• 手足口病
• 病毒样颗粒
• 毕赤酵母
• 免疫原性

目的利用巴斯德毕赤酵母制备重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并评价其免疫原性。方法将EV71的P1和3CD基因插入巴斯德毕赤酵母基因组中,构建EV71 VLPs表达质粒,转化巴斯德毕赤酵母KM71感受态细胞,Western blot法筛选高表达克隆,5 L发酵罐发酵,阳离子交换层析和凝胶体积排阻层析纯化EV71 VLPs。用不同剂量(0.05、0.5、5μg)的纯化EV71 VLPs免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗体滴度。结果 EV71 VLPs表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确。纯化的EV71 VLPs在电镜下可见大小均一、直径约为30 nm的典型VLPs;动态光散射分析显示,EV71 VLPs的流体力学直径为35.82 nm;经0.05、0.5和5μg EV71 VLPs免疫后,小鼠血清ELISA抗体的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为119、800和3 200,差异有统计学意义(P <0.01)。结论 EV71 VLPs在巴斯德毕赤酵母中成功表达,且具有良好的免疫原性。

• 单位
  上海生物制品研究所有限责任公司