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摘要
目的探讨circZfp609在小鼠成肌细胞系C2C12细胞增殖和分化过程中的作用及意义。方法采用核质分离实验观察增殖期与分化期C2C12细胞circZfp609核质分布情况;增殖期与分化期C2C12细胞分别分为circZfp609敲低组、Zfp609敲低组和对照组,分别转染特异性敲低circZfp609的siRNA、特异性敲低Zfp609的siRNA和对照siRNA。采用实时荧光定量PCR法检测增殖期C2C12细胞circZfp609及Zfp609 mRNA相对表达量,采用CCK8法检测增殖期C2C12细胞的细胞增殖率;采用免疫荧光法观察分化期C2C12细胞肌细胞生成素(myogenin, MYOG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MHC)蛋白表达情况,采用Western blot法检测分化期C2C12细胞MYOG、MHC蛋白相对表达量。结果增殖期C2C12细胞质中circZfp609占52.75%,分化期C2C12细胞质中circZfp609占71.38%。增殖期C2C12细胞circZfp609敲低组circZfp609相对表达量(0.124±0.008)低于对照组(1.000±0.064)(t=59.262,P<0.001),Zfp609 mRNA相对表达量(1.269±0.173)与对照组(1.000±0.052)比较差异无统计学意义(t=2.533,P=0.131);Zfp609敲低组circZfp609相对表达量(1.063±0.138)与对照组(1.000±0.159)比较差异无统计学意义(t=0.931,P=0.442),Zfp609 mRNA相对表达量(0.580±0.062)低于对照组(1.000±0.121)(t=12.936,P=0.007)。增殖期C2C12细胞circZfp609敲低组培养第3、4天细胞增殖率[(62.93±14.35)%、(49.96±8.14)%]均低于对照组[(100.00±11.63)%、(100.00±16.76)%](t=11.431,P=0.002;t=8.245,P=0.003);Zfp609敲低组培养第2、3天细胞增殖率[(139.06±7.58)%、(157.12±13.50)%]均高于对照组[(100.00±9.25)%、(100.00±23.68)%](t=3.324,P=0.037;t=6.062,P=0.009),培养第4天细胞增殖率[(109.73±17.94)%]与对照组[(100.00±14.59)%]比较差异无统计学意义(t=0.834,P=0.465)。在C2C12细胞分化期,与对照组比较,circZfp609敲低组细胞MYOG、MHC蛋白表达增强,细胞纤维长度增长,极化明显,出现细胞融合;Zfp609敲低组细胞MYOG、MHC蛋白表达呈不同程度降低,细胞纤维长度缩短,极化不明显,细胞融合减少。分化期C2C12细胞circZfp609敲低组MYOG和MHC蛋白相对表达量(1.281±0.091、1.698±0.104)均高于对照组(1.000±0.056、1.000±0.132)(t=0.045,P=0.013;t=0.012,P=0.005),Zfp609敲低组MYOG和MHC蛋白相对表达量(0.657±0.125、0.395±0.028)均低于对照组(1.000±0.056、1.000±0.132)(t=0.049,P=0.025;t=0.028,P=0.014)。结论 circZfp609参与了小鼠成肌细胞系C2C12细胞的增殖和分化过程,有可能成为骨骼肌增殖及分化异常疾病诊断与治疗的新靶点。
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