表达分泌荧光素酶的重组流感病毒构建及体外生物学特性研究

作者：王东红; 邓瑶; 叶飞; 周剑芳; 王文; 黄保英; 王梦微; 孟昕; 谭文杰^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2023, 43(11).

• 流感病毒
• 反向遗传学
• 荧光素酶
• A/WSN/1933 (H1N1)
• 重组病毒

目的采用不同的流感病毒骨架构建表达分泌荧光素酶(Gaussia luciferase, Gluc)的重组流感病毒, 同时研究其生长特性、遗传稳定性、Gluc表达水平、体外抗流感药物活性。方法在PR8NA的C端插入猪捷申病毒2A肽(porcine teschovirus-2A autocleavage peptide, P2A)自剪切位点及Gluc编码基因, 其余7个质粒分别来源于A/Puerto Rico/8/34(PR8) (H1N1)和A/WSN/1933(WSN) (H1N1), 通过流感病毒反向遗传学8质粒系统拯救重组病毒, 分别命名为PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN。检测重组病毒遗传稳定性;对比PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN的荧光强度;检测重组病毒的生长动力学;同时测定PR8NAGluc/WSN荧光强度与半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose, TCID50)的相关性及对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟的体外抗流感药物活性。结果通过反向遗传学成功拯救出以PR8和WSN为骨架表达Gluc的重组病毒。相对于PR8骨架, 以WSN为骨架明显提高了Gluc的表达且遗传稳定, 复制动力学比野生型稍低。PR8NAGluc/WSN荧光强度与TCID50有较好的相关性, 其对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟具有良好的敏感性。结论以WSN为骨架的重组病毒荧光表达强度比PR8骨架高, 为高通量筛选抗流感病毒药物及研发流感病毒载体疫苗提供参考。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所