人CD226分子胞膜外区D1和D2真核表达载体的构建、表达和鉴定

作者：邓虎平; 庄然; 贾卫; 张贝斌; 张圆; 户义; 张新海; 金伯泉

来源：免疫学杂志, 2007, (05): 499-501+505.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20070136

• CD226
• 真核表达
• 融合蛋白

目的构建含有人CD226分子胞膜外区结构域1(D1)和结构域2(D2)的真核表达载体,表达并纯化重组蛋白。方法用特异性引物分别扩增CD226D1和D2的基因,定向插入真核表达载体pSecTag2B-Fc,进行酶切和DNA测序鉴定,重组质粒瞬时转染293T细胞,收集上清,纯化蛋白及SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果利用PCR方法克隆出CD226胞膜外区D1和D2的基因,并正确插入pSecTag2B-Fc载体中,真核表达载体瞬时转染293T细胞,Western blot结果证实转染293T细胞的培养上清液中含有hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc融合蛋白,培养上清经亲和层析柱纯化,可获得较高纯度的重组蛋白。结论成功的构建了分泌型融合蛋白hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc真核表达载体,获得纯度较高的融合蛋白,为进一步探讨其配受体的相互作用机制奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学