本发明属于生物技术领域,公开了一种强化人胚胎干细胞源肝细胞极化和肝功能的分化方法及应用,具体公开了一种肝细胞分化方法,所述分化方法是通过在肝细胞分化和成熟过程中采用血清浓度差的方式进行。本发明通过在肝细胞分化和成熟过程中采用血清浓度差的方式,以非药物刺激的方式激活AMPK信号通路,达到进一步强化极化肝细胞的极化效果肝功能水平,如更高效的方向性分泌能力,更高水平的白蛋白及胆汁酸分泌能力。