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摘要
目的优化大尺寸脑组织样品的制备方法,将其用于小鼠耳蜗,获得适用于三维电镜和X射线显微镜成像的样品,用于耳蜗组织超微结构的病理及相关听觉疾病的研究。方法取3只野生型成年CBA/Ca小鼠耳蜗,经含0.08 M二甲胂酸盐缓冲液、2%多聚甲醛、2.5%戊二醛的4℃混合固定液灌注固定,添加了5%乙二胺四乙酸的混合液中低温短暂脱钙,采用还原性锇块染和铅染、脱水及树脂包埋。根据X射线显微镜和扫描电镜在不同尺度下的成像质量,对制备过程中步骤及时长进行了优化。结果 X射线显微镜下首次获得了具有毛细胞分辨率的完整小鼠耳蜗三维结构样品,其具有高染色对比度和均一性;扫描电镜及透射电镜下,样品中各结构,包括听神经髓鞘、传入传出突触、毛细胞静纤毛、线粒体结构形态均清晰可见。结论优化的完整小鼠耳蜗电镜块染样品制备方法使介观到微观的耳蜗三维超微结构的研究成为可能,为耳科疾病的病理结构研究提供了新方法。
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