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摘要
目的:探讨抑制叉头状转录因子O1(FoxO1)表达对糖尿病大鼠视网膜IL-1β的影响及其作用机制。方法:将人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)用不同浓度葡萄糖处理后,采用RT-PCR和Western blot检测细胞FoxO1、IL-1β表达。HRCECs按照处理方式分为空白对照组(Mock组)、阴性对照组(NC-FoxO1组)和siFoxO1组(si-FoxO1组),RT-PCR检测各组细胞FoxO1、IL-1βmRNA表达,Western blot检测各组细胞FoxO1、IL-1β、p-P38、p-JNK、p-ERK蛋白表达。60只大鼠随机分为对照组(Control组)、DM组、si-FoxO1转染组(LV-si-FoxO1组)和空病毒转染组(LV-NC组),DM组、LV-si-FoxO1组、LV-NC组建立糖尿病大鼠模型,造模成功后向大鼠玻璃体腔注射LV-si-FoxO1或LV-NC慢病毒载体,注射12周后分离视网膜组织,分别采用免疫组织化学染色、RT-PCR和Western blot检测大鼠视网膜组织FoxO1、IL-1β表达。结果:与5 mmol·L-1葡萄糖浓度组比较,15 mmol·L-1浓度组FoxO1、IL-1βmRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),25 mmol·L-1浓度组FoxO1、IL-1βmRNA和蛋白表达明显高于5 mmol·L-1浓度组,而35 mmol·L-1浓度组FoxO1、IL-1βmRNA和蛋白表达增加的更明显,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。si-FoxO1组IL-1βmRNA和蛋白表达明显低于NC-FoxO1组和Mock组(P<0.05),NC-FoxO1组和Mock组IL-1βmRNA和蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。DM组和LV-NC组FoxO1、IL-1βmRNA和蛋白表达明显高于Control组和LV-si-FoxO1组(P<0.05),LV-NC组与Control组FoxO1、IL-1β表达差异无统计学意义(P>0.05),DM组和LV-NC组FoxO1、IL-1β表达差异无统计学意义(P>0.05)。si-FoxO1组p-P38、p-JNK、pERK蛋白表达明显低于NC-FoxO1组和Mock组(P<0.05),NC-FoxO1组和Mock组p-P38、p-JNK、p-ERK蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:高糖能够诱导HRCECs FoxO1、IL-1β表达增加,抑制FoxO1表达可能是通过降低MAPK磷酸化下调HRCECs细胞IL-1β表达实现的。
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