胎鼠内侧神经节隆起区γ-氨基丁酸能前体细胞的培养及鉴定

作者：李益飞; 李镇宇; 陈文锦; 陈晨; 刘宁; 徐如祥

来源：中华神经医学杂志, 2017, 16(05): 439-444.

• 内侧神经节隆起区
• 前体细胞
• 抑制性中间神经元

目的探讨胎鼠内侧神经节隆起区(MGE)γ-氨基丁酸(GABA)能前体细胞的分离、培养及鉴定方法。方法体式显微镜下解剖分离E14.5孕鼠的胎鼠MGE脑组织,以含有音猥因子(SHH)信号通路激活剂的无血清培养基培养细胞至第3代及以上。(1)采用细胞免疫荧光染色检测MGE前体细胞中神经干细胞标记巢蛋白、SOX2、MGE转录因子NK2同源框蛋白1(Nkx2.1)及抑制性中间神经元前体细胞标记LIM同源框结合蛋白-6(LHX6)的表达以观察干细胞特性保持能力;(2)采用MTT法及BrdU免疫荧光染色检测体外培养1 d、3 d的MGE前体细胞的增殖能力;(3)采用细胞免疫荧光染色检测GABA能诱导培养基诱导分化5 d时的MGE前体细胞神经元标记神经核抗原(NeuN)及抑制性中间神经元标记GABA、谷氨酸脱羧酶-1(GAD67)、小清蛋白(PV)的表达以观察细胞分化能力;(4)采用冰冻切片免疫荧光染色检测移植到小鼠体内1月后的MGE前体细胞在体内分化成GABA、GAD67、PV阳性细胞的情况。结果成功的从胎鼠MGE分离培养出具有自我更新、增殖能力的神经球。细胞免疫荧光染色检测显示MGE前体细胞中巢蛋白、SOX2及LHX6、Nkx2.1阳性表达。MTT法检测发现MGE前体细胞体外培养1 d时吸光度值显著低于3 d时(0.392±0.032 vs 0.811±0.017),差异有统计学意义(P<0.05)。BrdU免疫荧光染色显示MGE前体细胞体外培养1 d时BrdU阳性细胞比例显著低于培养3 d时(45.086±7.122 vs 61.786±10.540),差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光染色检测显示MGE前体细胞诱导分化培养5 d时及移植到小鼠体内1月后分化为NeuN、GABA、GAD67、PV阳性的抑制性中间神经元。结论体外培养的MGE前体细胞仍具有前体细胞的干细胞特性及保持分化成抑制性中间神经元的能力。

• 单位
  南方医科大学; 中国人民解放军陆军总医院