磁小体介导的纳米复合物磁小体/Polo样蛋白激酶1基因的干扰质粒/柔红霉素的制备及表征检测

作者：柯友群; 程里; 余水生; 荆珏华^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(04): 734-736.

• 磁小体
• 骨肉瘤
• 交变磁场

目的将热激启动子(pHSP)调控的Polo样蛋白激酶1(shPLK1)以及柔红霉素(DOX)耦联于载体磁小体(BMs)上,制备复合物磁小体/PLK1基因/柔红霉素(BMs/pHSP-shPLK1/DOX)的干扰质粒并检测其表征。方法改变趋磁细菌培养液中成分优化趋磁细菌AMB-1的培养条件;分离纯化磁小体,在电镜下观察磁小体的形态;利用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒pHSP-shPLK1和DOX耦联至BMs构建复合物BMs/pHSP-shPLK1/DOX,检测复合物的粒径及电荷;观察在交变磁场(AMF)中复合物的产热效应及DOX的释放率;细胞免疫荧光检测复合物处理后U2OS细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达。结果趋磁细菌AMB-1的最佳生长条件为:以20 μmol/L FeSO4为铁源,以800 mg/L NaNO3为氮源,以200 mg/L的琥珀酸为碳源;电镜显示磁小体大小均匀,分散度好;复合物BMs/pHSP-shPLK1/DOX的粒径为(129.5±9.7) nm,Zeta电位为(-11.7±2.9) mV;在AMF下,复合物可在3 min之内升温至42 ℃,并维持30 min,该条件下,在24 h及48 h,50%胎牛血清(FBS)组上清液中DOX含量均明显高于磷酸盐缓冲液(PBS)组(t24 h=6.887,P24 h=0.020;t48 h=17.145,P48 h=0.000),50%FBS中DOX的释放率可达到54%;复合物处理后的细胞可见明显的GFP蛋白表达。结论成功制备BMs介导的复合物BMs/pHSP-shPLK1/DOX。

• 单位
  安徽医科大学第二附属医院