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摘要
目的:建立以全血为标本的流式细胞仪(FCM)检测抗红细胞相关抗体方法,探讨实验过程中各因素对检测结果的影响。方法:多参数、半定量FCM分析。结果:在细胞数稳定在(1.6～2.0)×105/μl时,稀释度为2∶1的抗-DIgG抗体即可使红细胞表面抗原饱和。随着加入的人抗-DIgG浓度逐渐增加,红细胞阳性率无变化;EDTA二钾、肝素钠和柠檬酸钠这3种抗凝剂之间各项指标差异无统计学意义;不同反应温度对阳性模型与二抗的反应无影响;抗体与样本反应时间在组内各时间段之间的比较中,反应时间>5min时平均荧光强度(MFI)、阳性率均无统计学差异;标本放置在室温与4℃下储存时,各时间段阳性细胞比例无明显差异,而标本放置时间超过2h后,MFI降低,标本在室温和4℃下存储24h内各时间段各项指标相比均无明显差异;二抗稀释度在≥1∶1时MFI即可达平台期;红细胞表面IgG抗体的参考范围:阳性细胞比例<0.33%,MFI<27.7;FCM法的重复性高。结论:全血法FCMFSC-SSC可特异地设置细胞门,无需指定特殊抗凝剂,不同反应温度对阳性模型与二抗的反应没有影响。反应时间>5min即可,存储温度在25℃及4℃时标本均应在2h内进行检测。二抗稀释度在1∶1时即可饱和红细胞表面抗体。FCM法的重复性较高。
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