大肠杆菌表达Trx-rPA融合蛋白的复性纯化

作者：易进华; 谭靖伟; 张元兴

来源：微生物学通报, 2007, (02): 236-240.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.2007.02.010

• 瑞特普酶
• 复性
• 包涵体
• 融合蛋白 Reteplase
• rPA
• Trx-rPA
• Refolding

大肠杆菌高密度发酵以包涵体形式表达融合蛋白Trx-rPA,表达量22%。包涵体蛋白洗涤后经金属螯合层析纯化,纯度达80%以上。经胱氨酸衍生,以脉冲加样形式复性,复性率可高达30%。经ETI-Sepharose纯化,复性的融合蛋白生物活性可达3.5×105IU/mgPr.。融合蛋白可被rEK酶切释放rPA,酶切效率达85%以上。酶切液经IDA-Sepharose和SP-Sepharose层析纯化,rPA纯度达98%以上,生物活性50万IU/mgPr.。1L发酵液经分离、复性及纯化后,可得高纯度rPA300mg以上。