植物乳杆菌p-8乙酰乙酸脱羧酶的原核表达及活性分析

作者：柳玫琪; 赵微; 秦雅丽; 刘扬; 赵国芬^*; 包秋华; 张和平

来源：内蒙古农业大学学报(自然科学版), 2022, 43(01): 40-47.

DOI：10.16853/j.cnki.1009-3575.2022.01.008

• 共轭亚油酸
• 植物乳杆菌P-8
• 乙酰乙酸脱羧酶
• 原核表达
• 同义突变

利用PCR扩增出植物乳杆菌p-8的乙酰乙酸脱羧酶基因,构建原核表达载体pET-28a-CLA-DC,转化Trans BL21细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot证明重组酶CLA-DC可大量表达且大部分为包涵体。在pET-28a-CLA-DC基础上将CLA-DC基因在133单位点、133和415两位点以及133、415和786 3个位点进行弱化同义突变,分别转化Trans BL21进行表达,结果显示3个同义突变体有效地提高了CLA-DC的可溶表达量;经Ni-IDA柱纯化后,CLA-DC的可溶表达量和比活力从大到小的顺序均为三位点突变体、两位点突变体和单点突变体。本研究为体外酶催化生产CLA和提高可溶性表达奠定基础。

• 单位
  生命科学学院; 内蒙古农业大学; 山西师范大学