三株沙门氏菌的鞭毛基因重组及蛋白的免疫特性

作者：饶星; 卢士英; 王颖; 李月婷; 沈庆丰; 柳增善; 张磊

来源：中国生物工程杂志, 2008, 28(S1): 82-86.

DOI：10.13523/j.cb.2008S116

• 沙门氏菌
• 基因重组
• 蛋白表达
• 免疫原性

三株强致病性的甲型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌I相鞭毛抗原分别为H-1a、H-1i、H-1c。设计三对引物,利用PCR扩增出具有决定抗原表位特异性的基因片段,长度分别为1088bp、633bp、1056bp。利用引物上的Linker和重叠延伸PCR扩增技术将此三段抗原决定区基因序列串联,获得重组鞭毛基因,共长2747bp。构建鞭毛重组基因(F-a-i-c)的原核表达载体pET-28a-F,将重组质粒转化大肠杆菌BL21株,经IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE电泳分析后得到目的蛋白大小约为95kDa,并优化表达条件。在37℃下终浓度为1mmol/L的IPTG诱导6h后,经薄层扫描分析得到目的蛋白表达量约为11.2%。超声破碎细胞后,纯化含有目的蛋白的包涵体,对八周龄雌性豚鼠做足垫免疫组,间接ELISA检测抗体效价为1:512000,敏感性为8μg/ml,这为后期抗体检测研究奠定了基础。

• 单位
  吉林大学