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摘要
目的构建裸鼠皮肤鳞状细胞癌(CSCC)移植瘤模型, 探讨紫外线(UV)损伤及人乳头瘤病毒(HPV)感染诱导、促进CSCC的协同作用机制。方法将人CSCC细胞A431分成3组, 即用HPV16 E6腺病毒转染的HPV16 E6过表达组, 空白腺病毒转染的空白载体组(简称空载组), 未进行腺病毒转染的空白对照组。使用无血清DMEM培养基将空载组及HPV16 E6过表达组(LV-OE-HPV16 E6组)A431细胞制成单细胞悬液, 分别接种于SKH-1裸鼠左侧臀部皮下作为空载组(n = 16)和LV-OE-HPV16 E6组(n = 16)。每3天观察并记录小鼠肿瘤生长情况, 当瘤体达到150 mm3时, 视为建模成功。建模成功后, 每组取8只小鼠进行UV照射, 分为4组, 即空载组、空载+ UV组、LV-OE-HPV16 E6组、LV-OE-HPV16 E6 + UV组, UV照射剂量为1 440 mJ/(cm2·d), 每次12 min, 持续4周后处死裸鼠, 测量瘤重及体积, 绘制肿瘤生长曲线, 免疫组化、Western印迹和qRT-PCR检测验证Wnt1、β联蛋白mRNA及蛋白在裸鼠CSCC中的表达。数据若符合正态分布, 多组间比较采用方差分析, 组间两两比较采用LSD-t检验;数据若不符合正态分布, 采用秩和检验对数据进行统计分析。结果空载+ UV组瘤重为(2.90 ± 0.36)g, LV-OE-HPV16 E6组(3.19 ± 0.32)g, LV-OE-HPV16 E6 + UV组(4.41 ± 0.18)g, 与空载组(2.20 ± 0.24)g比较, 差异均有统计学意义(t值分别为4.39、6.77、20.11, 均P<0.001);空载+ UV组瘤体积为(1 033.12 ± 400.15)mm3, LV-OE-HPV16 E6组(1 119.21 ± 447.57)mm3, LV-OE-HPV16 E6 + UV组(1 464.29 ± 409.98)mm3, 与空载组(688.94 ± 319.31)mm3比较差异均有统计学意义(t值分别为1.90、2.21、4.22, 均P<0.001)。免疫组化显示, 4组间Wnt1、β联蛋白表达水平差异无统计学意义(F值分别为0.76、0.71, 均P > 0.05);Western印迹显示, 4组间Wnt1、β联蛋白水平差异有统计学意义(F值分别为16.74、49.90, 均P<0.05), 且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1、β联蛋白水平高于空载组、空载+ UV组和LV-OE-HPV16 E6组(均P<0.05)。mRNA水平分析显示, 4组间组织中Wnt1、β联蛋白mRNA水平差异均有统计学意义(F值分别为7.77、8.38, 均P<0.05), 且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1 mRNA水平高于空载组、空载+ UV组和LV-OE-HPV16 E6组(均P<0.05)。结论 UV和HPV感染在诱导、促进CSCC中具有协同作用。
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