TNF-α诱导小鼠乳腺上皮细胞凋亡和程序性坏死研究

作者：杨彩霞; 杨敏; 王根林; 李亚南; 雷智琦; 李莲

来源：南京农业大学学报, 2021, 1-10.

• 小鼠
• 乳腺上皮细胞
• 凋亡
• 程序性坏死

[目的]本试验旨在探究TNF-α（肿瘤坏死因子-α）诱导对小鼠乳腺上皮细胞凋亡和程序性坏死的影响。[方法]体外培养小鼠乳腺上皮细胞系（HC-11细胞）并分为四个处理组，对照组（Ctrl），TNF-α组（T），TNF-α+CHX（环己酰亚胺）组（TC），TNF-α+CHX+Z-VAD-FMK（广谱caspase家族抑制剂）组（TCZ）；细胞加药浓度为TNF-α:(20、50、100 ng·mL-1)、CHX: 4 μmol·L-1、Z-VAD-FMK: 20 mmol·L-1。[结果]与对照组相比，100 ng·mL-1 TNF-α（T-100）处理12 h后细胞活力显著降低（P<0.001），50 ng·mL-1 TNF-α（T-50）和100 ng·mL-1 TNF-α（T-100）处理24 h后细胞活力显著降低（P<0.01），所有TC和TCZ处理12 h和24 h后细胞活力显著降低（P<0.001）；光学显微镜观察发现T，TC和TCZ处理后细胞呈不同程度死亡；与对照组相比，T组和TC组Bax/Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达水平均显著上升（P<0.05）；T组和TC组caspase-8 mRNA表达水平显著上升（P<0.01），而TCZ组caspase-8的mRNA水平显著降低（P<0.001），TC组和TCZ组RIP3， MLKL的mRNA表达水平显著上升（P<0.001），但只有TCZ组程序性坏死标志蛋白RIP3、MLKL和p-MLKL的表达量显著上升（P<0.01），且p-MLKL/MLKL的蛋白表达比值显著上升（P<0.05）；与对照组相比，TCZ组细胞内出现空泡、线粒体肿胀、断裂等坏死细胞所具有的细胞超微结构变化；TC组和TCZ组的PGAM5 mRNA表达水平显著上升（P<0.001），TCZ组的PGAM5蛋白表达水平显著上升（P<0.01），TC组和TCZ组的Drp1的mRNA和蛋白表达水平均显著上升（P<0.01）。[结论]TNF-α和TNF-α+CHX处理可诱导小鼠乳腺上皮细胞凋亡，TNF-α + CHX + Z-VAD-FMK处理可诱导小鼠乳腺上皮细胞发生程序性坏死。

• 单位
  南京农业大学; 动物科技学院