通脱木ISSR-PCR反应体系的建立及引物筛选

作者：孙菲菲; 韦霄; 邹蓉; 唐健民; 陈仕蕾; 梁蒙; 秦惠珍; 谷睿

来源：分子植物育种, 2022, 1-22.

• 通脱木
• 分子标记
• 正交试验
• 单因素试验
• ISSR-PCR

本实验以采于广西通脱木叶片为试验材料，采用单因素筛选和L_(16)(4~(5))正交设计相结合的方法对影响通脱木PCR试验的5种主要因素，即Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶和模板DNA进行优化，且在此基础上筛选出最适的循环次数和退火温度，从而建立最佳的通脱木ISSR-PCR反应体系。结果表明：在20 μL PCR反应体系中，Mg~(2+ )浓度2.0 mmol/L (1.6 μL)、dNTPs浓度0.3 mmol/L (0.3 μL)、Taq DNA聚合酶0.4 U、引物浓度0.6 μmol/L (1.2 μL)、模板DNA 60 ng (2 μL)为最佳用量，最佳退火温度为52.3℃，最佳循环次数为40次。所建立的PCR反应体系通过优化后扩增稳定并筛选出条带清晰、多态性较好的9条引物，该反应体系可以为通脱木后续ISSR遗传多样性分析提供技术支撑。

• 单位
  桂林医学院; 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所