筛选鉴定不稳定性心绞痛淋巴细胞差异表达基因

作者：张斌; 梁雪清; 余细勇; 冯建章; 靳立军; 董太明; 乌汉东; 黄涛

来源：中华心血管病杂志, 2004, (01): 39-42.

DOI：10.3760/j:issn:0253-3758.2004.01.012

• 心绞痛,不稳定
• 抑制性消减杂交
• 基因

目的　筛选鉴定不稳定性心绞痛淋巴细胞差异表达基因 ,从分子水平探讨不稳定性心绞痛的发病机理。为不稳定性心绞痛早期诊断和潜在可能的基因治疗提供线索。方法　应用抑制性消减杂交技术筛选不稳定性心绞痛淋巴细胞和稳定性心绞痛淋巴细胞差异表达基因。将获得的顺向或逆向消减产物与 pGEM TEasyVector连接并转化大肠杆菌JM10 9,采用蓝白斑筛选和菌落PCR筛选有插入片段的克隆。将获得的菌落PCR产物分别等量点在 2张Hybond N +膜的同一位置上 ,同时与顺向消减和逆向消减产物进行斑点杂交 ,进一步筛选差异表达的cDNA片段。以获得的序列表达标签 (EST)为探针 ,与顺向消减和逆向消减产物进行反向Northern杂交 ,将获得的阳性EST测序 ,并进行同源性比较。结果　斑点杂交结果显示 :在不稳定性心绞痛组获得 93个阳性克隆 ,在稳定性心绞痛组获得 112个阳性克隆 ;反向Northern杂交结果显示 :在不稳定性心绞痛组获得 12个阳性EST ,在稳定性心绞痛组获得 2 0个阳性EST ,在各组中随机选取 5个阳性EST测序并进行同源性比较 ,全部为已知基因的部分序列。结论　这些EST与不稳定性心绞痛的发生与发展密切相关

• 单位
  广东省心血管病研究所