冷冻保存新生牛睾丸组织中支持细胞的分离纯化

作者：姜禹; 赵欣欣; 安星兰; 蔡宁宁; 张胜; 王添; 唐博; 李子义; 张学明^*

来源：中国兽医学报, 2019, 39(01): 158-162.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.01.28

• 新生牛
• 睾丸组织
• 冷冻保存
• 支持细胞
• 差异贴壁

睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)是生精上皮中的多功能体细胞,其分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要。因牛新鲜睾丸组织取材不便,本试验在前期基础上探讨了从冷冻保存的新生牛睾丸组织中分离纯化SCs的可行性。将冻存的1日龄牛睾丸组织复苏,进行形态学检查和SCs分离培养。石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色显示,曲细精索及睾丸间质保存完好。二步酶消化结果显示,生精上皮解离良好。利用差异贴壁法将原代细胞纯化后扩大培养,绝大多数细胞呈不规则多边形,3d即可生长至汇合。RT-PCR分析显示,贴壁细胞表达SCs阳性分子标记胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和雄性激素结合蛋白(ABP)而不表达精原细胞分子标记PLZF。流式细胞术检测显示,所获细胞中ABP和GDNF阳性细胞数分别为99.7%和99.8%。以上结果表明,从冻存的新生牛睾丸组织中可获高纯度的SCs。本试验结果为后续相关试验奠定了基础。

• 单位
  吉林大学第一医院; 转化医学研究院; 吉林大学