益气养阴通络方经凋亡通路治疗类风湿关节炎的网络药理学预测与验证

作者：刘颖姝; 高明利^*

来源：辽宁中医杂志, 2022, 49(06): 11-222.

DOI：10.13192/j.issn.1000-1719.2022.06.003

• 益气养阴通络方
• 类风湿关节炎
• 网络药理学
• 凋亡
• 巨噬细胞

目的 利用网络药理学方法探讨益气养阴通络方治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的分子机制并通过体外实验进行验证。方法 采用网络药理学策略研究益气养阴通络方治疗RA的作用机制。RA的靶基因选自TTD、OMIM和GeneCards数据库。TCMSP数据库用于分析益气养阴通络方的有效化合物和他们的靶基因。益气养阴通络方复合靶基因网络由Cytoscape软件建立。GO富集分析和KEGG通路分析用于确定益气养阴通络方可能参与的生物学过程和信号通路。利用大鼠灌胃获取益气养阴通络方含药血清。使用CCK-8试剂盒检测细胞活力。使用AnnexinⅤ-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。使用Western-blot分析检测pro-Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax和Bcl2的蛋白表达水平。结果 网络药理学研究结果显示，与RA相关的基因共3668个，益气养阴通络方的靶基因共251个，其中有161个益气养阴通络方的靶基因与RA相关基因重叠。根据Cytoscape分析，24种活性化合物和61个基因被筛选出来，形成交互网络。GO富集提示外源性凋亡通路是益气养阴通络方治疗RA的核心生物学信号通路之一。KEGG分析显示凋亡信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路和P53信号通路是益气养阴通络方治疗RA的关键通路。体外实验结果显示，益气养阴通络方含药血清及原药均可显著抑制RAW264.7巨噬细胞的细胞活力，均可显著促进RAW264.7巨噬细胞的凋亡。Western-blot结果显示益气养阴通络方的含药血清及原药均可显著增加RAW264.7细胞中cleaved Caspase-3/pro-Caspase-3、Bax/Bcl2的表达比率。这与网络药理学预测一致。结论 网络药理学分析提示益气养阴通络方主要通过24种活性成分及61个靶基因发挥治疗RA功效的。凋亡信号通路是益气养阴通络方治疗RA的重要机制之一。实验室研究证实益气养阴通络方含药血清或原药均可在体外促进RAW264.7巨噬细胞凋亡。

• 单位
  辽宁中医药大学; 辽宁中医药大学附属医院