真核表达重组骨形态发生蛋白9的纯化及生物骨诱导活性分析

作者：甘强; 胡侦明; 郝杰; 江维; 沈皆亮; 王大武; 钟小明; 方剂

来源：生物医学工程学杂志, 2013, 30(04): 822-827.

• 重组人骨形态发生蛋白9
• 真核体系
• 蛋白纯化
• 骨诱导

本文主要探讨通过生物技术重组纯化的骨形态发生蛋白9(BMP-9)的体外诱导成骨活性。用PCR技术扩增人骨形态发生蛋白9(hBMP-9)全长序列,构建真核表达载体pcDNA4/His.Max-hBMP-9,与质粒pSV2-dhfr共同转染CHO-dhfr-细胞,用含有100μg/mL博来霉素的IMDM进行筛选和MTX系统扩大目的基因的整合,从而获得高表达重组人骨形态发生蛋白9(rhBMP-9)的抗性单克隆株。收集最高表达蛋白的单克隆株培养基上清,经His标签的蛋白纯化柱纯化,Western blot和SDS-PAGE检测显示有分子量分别约32kD和50kD的条带。用浓度分别为20、50和100μg/mL的rhBMP-9刺激培养C3H10T1/2,培养7d和20d后分别检测碱性磷酸酶和骨钙素、骨桥蛋白的表达。各项早晚期成骨指标显示,rhBMP-9具有较强的体外诱导成骨能力,且与浓度成正相关。本研究表明,通过生物医学技术构建的rhBMP-9具有较强的骨诱导性,为进一步体内试验以及临床应用奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院