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摘要
目的：分离鉴定金银花炭疽病病原菌，并建立该病原菌的实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系。方法：采集金银花炭疽病病叶标本，对病原菌进行分离和纯化，利用柯赫氏法则检测病原菌的致病性，通过形态学观察结合分子生物学分析鉴定病原菌；基于病原菌的ITS序列设计特异引物和TaqMan荧光探针，并基于该病原菌特异引物的扩增产物制备重组质粒标准品，利用标准品DNA构建qPCR的标准曲线；并对建立的qPCR方法进行特异性、灵敏度和实际样本验证。结果：明确从金银花炭疽病病叶片中分离纯化的菌株为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides。建立的qPCR快速检测方法能够特异性检测该病原菌，灵敏度高，最低检测限为2.94×102 copies/μL,比常规PCR检测灵敏度提高100倍。实际样本验证结果显示，在20例金银花病叶中，4例为炭疽病阳性，与DNA测序结果相符。结论：本研究明确胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides为金银花炭疽病的病原菌，所建立的qPCR方法能对金银花炭疽病进行快速、准确的检测，可以为该病害的早期防治提供技术支持。
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