高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统的构建

作者：陈相好; 刘芳; 王彩霞; 陈峥宏; 洪伟; 蔡梦迪; 张峥嵘; 綦廷娜; 廖永慧; 谷俊莹^*; 崔古贞^*

来源：生物技术通报, 2019, 35(06): 213-220.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0883

• Targetron
• Ⅱ型内含子
• 诱导系统
• 大肠杆菌
• lacZ

构建高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统。将来源于pET28a的T7-lac操纵子与来源于pSY6的Ⅱ型内含子组装构建大肠杆菌IPTG诱导型Targetron质粒系统。以lacZ基因为例,选择lacZ-635s和lacZ-1063a两个位点为靶位点,利用构建的IPTG诱导型Targetron系统进行基因打靶,通过分析诱导前和诱导后Ⅱ型内含子在靶位点的插入效率,验证大肠杆菌IPTG诱导型Targetron系统严谨性和打靶效率。最后,通过优化诱导剂浓度及诱导时间,建立高效严谨的诱导型大肠杆菌Targetron基因打靶系统。在没有IPTG诱导时,Ⅱ型内含子在两个位点均不能插入,打靶效率均为0;当加入0.5 mmol/L IPTG诱导45 min时,其在lacZ-635s位点的打靶效率提高到90.8±5.5%,在lacZ-1063a位点的打靶效率提高到92.6±2.4%。成功建立高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统,旨为Ⅱ型内含子的机理研究及应用奠定基础。

• 单位
  基础医学院; 贵州医科大学